Biokemian harjoitustöiden (BKE 234) 2. kuulustelu 5.5.1995 klo 9-11
1. Selitä eri inhibitiotyypit ja niiden vaikutus K -arvoon.
2. a) Geelisuodatuksessa haluttu proteiini eluoitui 1 x 30 cm:n geelipatsaassa 18,2 ml:ssa. Laske Kav-arvo (jakautumisvakio), kun geelipartikkelien ulkoinen tilavuus oli 9,6 ml. Oliko huokoskoko valittu oikein?
b) Miten voit määrittää puhdistamasi proteiinin molekyylipainon? Mainitse kaksi eri tapaa. Miten tutkisit proteiinin alayksikkökoostumusta?
3. Erkin seerumin proteiinipitoisuus määritettiin Lowryn menetelmällä käyttäen vakiona albumiiniliuosta, jonka pitoisuus oli 0,100 mg/ml. Eri putkiin pipetoidut määrät ilmenevät alla olevasta taulukosta. Nollakokeeseen pipetoitiin 1000 m l vettä. Seeruminäytettä laimennettiin ensin 100 m l 10 ml:ksi ja tätä laimennosta otettiin määritykseen 100 m l. Tilavuus täytettiin kaikissa putkissa 1000 m l:ksi vedellä. Alkalista kuparireagenssia lisättiin 2,0 ml ja reaktion annettiin tapahtua tasan 10 minuuttia, minkä jälkeen lisättiin 0,5 ml Folin-Ciocalteaun fenolireagenssia. Laske seerumin proteiinipitoisuus, kun nollakoetta vastaan mitatut absorbanssit 750 nm:n aallonpituudella olivat seuraavat:
|
Näyte |
Näytemäärä (m l) |
A750 |
|
albumiinivakio |
100 |
0,104 0,105 |
|
'' |
200 |
0,160 0,165 |
|
'' |
400 |
0,275 0,270 |
|
'' |
600 |
0,385 0,470 |
|
'' |
800 |
0,500 0,492 |
|
'' |
1000 |
0,610 0,600 |
|
seerumilaimennos |
100 |
0,440 0,440 |