BKE120 Biokemian työtavat. Tentti 16.12.1998

 

Vastaa kysymyksiin 1-4 rengastamalla oikeat väittämät.

 

1.

  1. Yhdessä moolissa ainetta on aina sama määrä molekyylejä.
  2. Hemoglobiinista ei voi valmistaa 0,1 M liuosta.
  3. 0,5 M NaCl-liuoksen ionivahvuus on sama kuin sen molaarisuus.
  4. 0,5 M glukoosiliuoksen ionivahvuus on 0,5 M.
  5. Kun 0,5 M liuos laimennetaan 2:5, pitoisuudeksi tulee 0,2 M.
  6. Liuos laimennetaan 2:5 siten, että otetaan 2 osaa liuosta ja 5 osaa laimenninta.
  7. Liuosta laimennettaessa tilavuuden ja väkevyyden suhde ei muutu.
  8. Laimentaminen laskee happoliuoksen pH:ta.

 

2.

  1. Automaattipipetti on pipetti, joka voidaan ohjelmoida pipetoimaan automaattisesti.
  2. Mittapipetti on yleensä tarkempi kuin täyspipetti.
  3. pH-mittari on volttimittari, joka mittaa jännitteen kahden elektrodin välillä
  4. Kombinaatioelektrodilla voidaan mitata sekä pH:ta että ionivahvuutta
  5. Johtokykymittaria käytetään ionivahvuuden mittaamiseen.
  6. Kvartsikyvettiä ei voi käyttää absorptiomittauksiin UV-alueella.
  7. Monokromaattori on välttämätön varuste spektrofotometrissä.
  8. Sentrifuugin sähkömoottoria kutsutaan roottoriksi.

 

3.

  1. Suolasaostusta voi käyttää proteiiniliuoksen konsentrointiin.
  2. loninvaihtokromatografia on konsentroiva menetelmä.
  3. Dialyysiä käytetään usein liuoksen ionivahvuuden alentamiseen.
  4. Proteiiniliuos pitää yleensä konsentroida ennen ionivaihtokromatograriaa.
  5. Proteiiniliuos pitää yleensä dialysoida ennen geelisuodatusta.
  6. Geelisuodatuksessa neutraalit molekyylit kulkevat nopeammin.
  7. Geelisuodatusta voidaan käyttää suolan poistoon, puskurin vaihtoon ja molekyylipainon määrittämiseen

 

4.

  1. Proteiini liikkuu elektroforeesissa kohti katodia, kun pH>pI.
  2. Isoelektrisessä fokusoinnissa proteiini liikkuu aina kohti isoelektristä pistettä.
  3. SDS-PAGE:ssa proteiinin isoelektrinen piste ei vaikuta liikkumiseen.
  4. SDS-PAGE:ssa merkaptoetanoli suojaa disulfidisidoksia
  5. Elektroforeesissa korkea ionivahvuus parantaa erottumista.
  1. F Akryyliamidin polymeroituminen tarvitsee happea
  1. Western Blotissa näytteet siirretään ennen detektiota nitroselluloosakalvolle.
  2. Kaksisuuntaisessa elektroforeesissa näytteet erotellaan esim. isoelektrisellä fokusoinnilla ja sen jälkeen SDS-PAGElla.

 

5.

Veri on nestemäinen kudos, jossa pH:n muutoksia vastustavat etupäässä proteiinit (hemoglobiini, albumiini. jne.), hiilihappo suoloineen, sekä fosfaatit.

Laske mikä on veriplasman pH, kun siitä mitattiin seuraavat pitoisuudet:
[H2CO3] = 1,50 mM,
[HCO3-] = 25,5 mM,
[H2PO4] = 0,715 mM.,
[HPO42-] = 0,985 mM
Hiilihapolle pKa1 = 6,11 ja fosforihapolle pKa2 = 7,20.

 

6.

Tris(hydroksimetyyli)aminometaani, lyhyesti Tris on heikko emäs, jolle pKa = 8,08. Kerro tarkasti, kuinka valmistaisit 2 litraa 50 mM Tris-Cl puskuria pH 8,6, jos sinulla olisi käytettävissä pH-mittari, kiteinen Tris (M = 121,1 g/mol) ja väkevä vetykloridihappo (37% (w/w) HCI, r = 1,19 g/ml, M = 36,46 g/mol).

 

7.

Ammoniumsulfaattisaostuksen jÄlkeen proteiinisakka liuotettiin 25 mM Na-asetaattipuskuriin siten, että tilavuudeksi tuli 22 ml, proteiinipitoisuudeksi 32 mg/ml ja ionivahvuudeksi 1,42 M. Proteiiniliuos jaettiin kahteen yhtä suureen osaan ja molempia puoliskoita dialysoitiin 20 tuntia vettä vastaan. Toisen puoliskon dialyysissä ulkoliuosta oli 10 litraa, eikä sitä vaihdettu kertaakaan. Sen sijaan toisen puoliskon dialyysissä ulkoliuosta oli vain 100 ml ja se vaihdettiin viiden tunnin välein. Laske, mitkä olivat näiden kahden näytepuoliskon proteiinipitoisuudet ja ionivahvuudet dialyysien jälkeen.

 

8.

Hunajan glukoosipitoisuus määriteltiin entsymaattisesti heksokinaasin (HK) ja glukoosi-6-fosfaattidehydrogenaasin (G6P-DH) avulla seuraavien reaktioiden mukaisesti:

Glukoosi + ATP ———> glukoosi-6-fosfaatti + ADP

Glukoosi-6-fosfaati + NADP+ ———> 6-fosfoglukono-1,5 laktoni + NADPH

Spektrofotometrin kyvettiin (l = 1 cm) pipetoitiin

1,0 ml 0.01% (w/v) hunajaliuosta

1,7 ml 0,3 M trietanoliamiinipuskuria pH 7,5

0,1 ml 15 mM ATP-liuosta

0,1 ml 12 mM NADP+-liuosta

Liuoksen absorbanssi mitattiin aallonpituudella 340 nm ja reaktio käynnistettiin lisäämällä 0,1 ml entsyymiseosta (8 U HK ja 4 U G6P-DH).

Reaktion saavutettua tasapainon liuoksen A340 oli kasvanut 0,403 yksikköä.

Laske, kuinka monta grammaa glukoosia on 100 grammassa hunajaa, kun glugoosin moolimassa on 180 g/mol ja NADPH:n molaarinen absorptiviteetti 340 nm:ssa on 6220 1 mol-1cm-1.